پروتیناز k چیست ؟

پروتئیناز کا

پروتئیناز کا یک آنزیم پروتئولیتیک با طیف وسیع و غیر اختصاصی است که به طور گسترده در زیست شناسی مولکولی برای غیرفعال کردن آلاینده های پروتئینی در نمونه های آماده استفاده می شود. این اندوپپتیداز در محدوده وسیعی از pH، بهینه بین 6.5 تا 9.5، و دماهای نسبتا بالا، بهینه 50-65 درجه سانتیگراد، فعال باقی می ماند.

این پروتئین بسیار مقاوم است، در حضور نمک های آشفته، مواد شوینده و در دماهای بالا به عملکرد خود ادامه می دهد و یک روش کارآمد و قابل اعتماد برای بیشتر کاربردها ارائه می دهد.

پروتئیناز K که به نام پروتئاز K نیز شناخته می‌شود، توسط Tritirachium album Limber ترشح می‌شود، اگر این کپک در حضور کراتین رشد کند، بنابراین به عنوان تنها منبع نیتروژن، “K” نامیده می‌شود.

پروتئیناز K

پروتئیناز K = پروتئین (زنجیره بلند اسیدهای آمینه) + آز (پسوند آنزیم) + K (کراتین)

فعالیت

پروتئازها آنزیم هایی هستند که تجزیه پروتئین را به اسیدهای آمینه کاتالیز می کنند، پروتئیناز کا یک پروتئاز سرین با طیف گسترده ای است که متعلق به کلاس سوبتیلیسین است (دو نوع پروتئاز سرین وجود دارد، کیموتریپسین و سوبتیلیسین). این آنزیم از خانواده پپتیدازهای S8 است. محل غالب برش، پیوند پپتیدی مجاور گروه کربوکسیل اسیدهای آمینه آلیفاتیک و آروماتیک با گروه های آلفا آمینه مسدود شده است.

یون کلسیم کوفاکتور آنزیم پروتئیناز K است، یون‌های کلسیم بر فعالیت آنزیم تأثیر نمی‌گذارند، اما به پایداری آن کمک می‌کنند (پایداری حرارتی و محافظت از پروتئیناز K در برابر اتولیز)، اگر یون‌های کلسیم حذف شوند (مثلاً با استفاده از EDTA)، پایداری آنزیم کاهش می یابد، اما فعالیت پروتئولیتیک حفظ می شود.

هضم پروتئیناز کا برای خالص سازی اسید نوکلئیک معمولاً در حضور EDTA (که برای مهار آنزیم های وابسته به یون فلزی مانند نوکلئازها ضروری است) انجام می شود. EDTA تأثیر مستقیمی بر فعالیت آنزیم پروتئیناز K ندارد، می تواند بر کلسیم تأثیر بگذارد و در نتیجه فعالیت پروتئیناز K را تا حدی کاهش دهد.

پروتئیناز K و RNaseها معمولاً در بافر لیز با هم اضافه می شوند زیرا ترکیب کارآمدی را تشکیل می دهند. RNase آر ان آ (RNA) آلوده را تجزیه می کند و پروتئین K پروتئین ها، DNase ها و RNase های آسیب دیده را تجزیه می کند.

پایداری پروتئیناز K

پروتئیناز K در محدوده وسیعی از pH (از 4 تا 12) و دما (از 37+ تا 65+ درجه سانتی گراد) پایدار است. افزایش دمای واکنش از 37 درجه سانتی‌گراد به 50 تا 60 درجه سانتی‌گراد، می‌تواند فعالیت را چندین برابر افزایش دهد، با در دسترس‌تر کردن محل‌های برش آن، مانند افزودن 0.5 تا 1 درصد سدیم دودسیل سولفات (SDS) یا کلرید گوانیدینیم (3 مولار)، گوانیدینیم تیوسیانات (1 مولار) و اوره (4 مولار).

پروتئیناز K برای چه مواردی استفاده می شود؟

◉ پروتئیناز K معمولاً در زیست‌شناسی مولکولی برای هضم پروتئین‌ها، حذف آلودگی‌ها و غیرفعال کردن DNaseها و RNase‌ها استفاده می‌شود که در غیر این صورت یک نمونه DNA یا RNA مورد نظر را تجزیه می‌کنند. پروتئیناز k برای این کاربرد مناسب است زیرا آنزیم در حضور مواد شیمیایی دناتوره کننده پروتئین مانند SDS و اوره، عوامل کیلیت کننده مانند EDTA، معرف های سولفید هیدروژن و تریپسین یا مهارکننده های کیموتریپسین فعال است.

◉ برای تخریب پروتئین ها در لیزات سلولی (بافت ها، سلول های کشت سلولی) و برای آزادسازی اسیدهای نوکلئیک استفاده می شود.

◉ پروتئيناز K براي مشخص كردن پروتئين ها نيز مفيد است: با توجه به ويژگي برش پروتئيناز K، قطعات مشخصي از پروتئين ها به دست مي آيد كه براي تعيين ساختار و عملكرد پروتئين ها مفيد هستند.

◉ پروتئیناز کا در جداسازی DNA یا RNA بسیار بومی و سالم بسیار مفید است، زیرا اکثر DNaseها و RNaseهای میکروبی یا پستانداران به سرعت توسط آنزیم غیرفعال می شوند، به ویژه در حضور 0.5 در SDS 1٪.

چگونه پروتئیناز K را غیر فعال می کنید؟

پروتئیناز K با حرارت دادن در دمای 95 درجه سانتی گراد به مدت 10 دقیقه غیرفعال می شود (حرارت دادن پروتئیناز K آنزیم را به طور کامل غیرفعال نمی کند، همیشه مقدار کمی از فعالیت از طریق این روش باقی می ماند.)، اسید تری کلرواستیک (TCA) یا مهارکننده های پروتئاز سرین AEBSF ،PMSF یا DFP (پروتئیناز K را به طور دائم غیرفعال می کند)

وظیفه پروتئیناز k در استخراج DNA چیست؟

1. در طول استخراج DNA (یا اسیدهای نوکلئیک به طور کلی)، بسیاری از پروتئین های آلوده وجود دارند. پروتئیناز K در بسیاری از پروتکل های استخراج DNA برای هضم این پروتئین های آلوده استفاده می شود.
2. علاوه بر این، نوکلئازها (آنزیم هایی که اسیدهای نوکلئیک را تجزیه می کنند) ممکن است وجود داشته باشند، افزودن پروتئیناز کا این نوکلئازها را تجزیه می کند و از اسیدهای نوکلئیک در برابر حمله نوکلئاز محافظت می کند.

پپسین (Pepsin):

همانطور که می دانید مدل های مختلفی از رنگ ها و مشخصات وجود دارد که هر کدام دارای فرمولاسیون گوناگونی هستند و رنگ ها و مشخصات هر یک برای یک آزمایش آزمایشگاهی خاص در نظر گرفته شده است.

پپسین چیست:

پپسین نوعی اندوپپتیداز می باشد که پروتئین ها را به پپتیدهای کوچکتر (پروتئازها) تجزیه می کند. این ماده از نظر بیولوژیکی در معده حیوانات تولید می شود و یکی از آنزیم های اصلی گوارشی در دستگاه گوارش انسان و بسیاری از حیوانات دیگر می باشد که به هضم پروتئین از غذا کمک می کند. پپسین یک پروتئاز اسیدی مهم است که به طوروسیعی در هیدرولیز پروتئین ها استفاده می شود. در استخراج ژلاتین از کلاژن به عنوان جایگزین آب پنیر و در هضم درمانی استفاده می شود. پپسین از پستانداران متفاوت جدا شده و در انسان ، میمون ژاپنی ، خوک ، گاو ، بز ، موش و خرگوش مورد بررسی قرار گرفته است. پپسین در آب معده از لومن معده یافت می شود و می تواند از گونه های مختلف انسان ، گاو ، گوسفند ، پرندگان و ماهی جدا شود. پپسین در درجه اول در پستانداران معده (هر دو غشاء و شیره معده) یافت می شود ، اما در مقادیر محدودی در خون ، ماهیچه ها و ادرار نیز یافت می شود. مدل های گوناگونی از پپسین معده وجود دارد که هریک ساختار پروتئینی متمایز و خواص آنزیمی دارند. پپسین دارای ساختار سه بعدی می باشد که در آن یک یا چند زنجیره پلی پپتیدی پیچ خورده و با هم جمع شده و تعداد کمی آمینو اسید تشکیل می دهند تا محل فعال یا محل آنزیم در محل اتصال بستر و واکنش ایجاد شود. پپسین یک پروتئاز آسپارتیک می باشد که از کاتالیزور آسفالت در محل فعال خود استفاده می کند.

پپسین در معده

پپسین در غشای معده در حالت غیر فعال به نام پپسینوژن (PG) (وزن مولکولی 40 کیلو دالتون) تولید و ترشح می شود. در مقایسه با پپسین ، پپسینوژن حاوی 44 اسید آمینه اضافی می باشد و در محیط های خنثی و ضعیف قلیایی پایدار است.

پپسین و پپسینوژن

پپسین یکی از سه پروتئاز اصلی در دستگاه گوارش انسان می باشد، دو مورد دیگر کیموتریپسین و تریپسین می باشند.. در طول فرآیند هضم در سیستم گوارش ، این آنزیم ها که هریک در تجزیه انواع خاصی از اسیدهای آمینه تخصص دارند ، با هم کار می کنند تا پروتئین های رژیم غذایی را به اجزای خود ، پپتیدها و اسیدهای آمینه تجزیه کنند که به آسانی جذب می شوند. در روده باریک ، پپسین در حذف پیوندهای پپتیدی بین آمینو اسیدهای آب گریز و ترجیحاً معطر مانند فنیل آلانین ، تریپتوفان و تیروزین 12 موثرتر می باشد. پپسین پپسینوژن توسط سلول های اصلی بدن آزاد می شود. دیواره معده و پس از مخلوط شدن با اسید کلریدریک ، پپسینوژن فعال شده و به پپسین تبدیل می شود.

فاکتور موثر بر فعالیت پپسین

فعالیت پپسین می تواند به شدت تحت تأثیر دما ، pH و مهار کننده ها باشد.

PH

pH مطلوب (مقدار pH با بیشترین فعالیت آنزیمی) و پایداری pH (محدوده pH که آنزیم مناسب را تثبیت می کند) تأثیرات مهمی بر فعالیت پپسین دارد. موقعی که pH از مقدار مطلوب خارج شود ، فعالیت پپسین کاهش می یابد.

درجه حرارت

دما تأثیر زیادی بر فعالیت پپسین دارد. مانند pH مطلوب و میزان پایداری حرارتی بسیار مهم است. پپسین بیشتر در محیط های اسیدی بین 37 تا 42 درجه سانتی گراد فعال می باشد.

بازدارنده ها

پپستاتین A (یک مهار کننده معمولی پروتئیناز آسپارتیک) می تواند با پپسین ترکیب شود تا از اتصال آنزیم به بستر پیشگیری شود ، در نتیجه از فعالیت آن به صورت کامل جلوگیری می کند.

پپاتین A یک پپتید جدا شده از چندین گونه اکتینومایست مانند Streptomyces spp است. این یکی از کمترین ثابت های مهاری شناخته شده (Ki = 45 pM) برای پپسین می باشد.

برنامه های کاربردی پپسین

وظیفه پپسین چیست

تحقیقات پزشکی

پپسین در تنظیم هضم به عنوان ضدعفونی کننده دندان و در درمان بیماری هایی مانند سوء هاضمه ، معده ، استفراغ مداوم ، اسهال نوزادان ، بیهوشی و برخی سرطان ها استفاده می شود. قرص ها و کپسول های پپسین با HCl برای حمایت از قابلیت هضم دستگاه گوارش و همچنین افزایش اشتهای بیمار ساخته شده اند. پپسین از معده خوک ها برای درمان زخم معده با کمپلکس های بیسموت اضافه می شود. پپسین همچنین برای هضم بهتر پروتئین به خوراک دام اضافه می شود. پپسین همچنین معمولاً برای ساخت آنتی بادی علیه قطعات F (ab ') 2 استفاده می شود.

پنیر سازی

آب پنیر حیوانی از پپسین و کیموزین تشکیل شده می باشد که معمولاً در نسبت 1.9 مخلوط شده و در تولید پنیر تجاری استفاده می شود. در طول فرآیند تولید غذا ، پپسین برای طعم دادن به غذاها و نوشیدنی ها مفید می باشد.

استخراج کلاژن

کلاژن معمولاً با یک فرایند محلول در اسید (ASP) استخراج می شود که در آن کلاژن در یک اسید (مانند اسید استیک) حل شده و سایر مواد نامحلول در اسید حذف می شوند. از آنجایی که پپسین می تواند پیوندهای عرضی را در مناطق پپتیدی کلا کلاژن از بین ببرد بدون آسیب رساندن به ساختار ثانویه آن ، استفاده از پپسین در این فرایند می تواند عملکرد کلاژن را به صورت موثر افزایش دهد.

تصفیه

فرایند تجزیه پپسین به صورت معمول شامل سه مرحله می باشد:

الف) استخراج پپسینوژن ، که شامل تهیه معده و عصاره خام می باشد

(ب) تصفیه پپسینوژن

(ج) فعال شدن پپسینوژن به پپسین.

همه این مراحل در دمای پایین (4 درجه سانتی گراد) انجام می شود تا از تغییر رنگ پروتئین ها پیشگیری شود.

قیمت محلول پپسین

محیط های کشت در انواع گوناگون در فروشگاه آنلاین و دارای نماد اعتماد الکترونیکی  آریا طب با قیمت مناسب به فروش می رسد می توانید از طریق همین سایت نسبت به خرید اینترنتی این محصولات اقدام نمایید.

قرص پپسین

پپسین کجا ساخته میشود

فروش مرک پپسین

شرکت اینترنتی آریا طب فعال در زمینه فروش مواد شیمیایی صنعتی و آزمایشگاهی آماده ارائه خدمات در زمینه فروش پپسین مرک با کیفیت عالی و قیمت مناسب به مشتریان می باشد. این محصول مخصوص مرک آلمان می باشد که با قیمت و کیفیت مناسب به فروش می رسد. برای کسب اطلاعات بیشتر در مورد فروش مرک پپسین می توانید با همکاران ما در واحد فروش آریا طب تماس حاصل فرمایید.

مراحل اولیه هضم غذا در معده انجام می شود. در معده مخلوطی از ترکیبات شامل آب، مخاط، اسید کلریدریک، پپسین و فاکتور ذاتی ترشح می شود. به مجموع این ترکیبات شیره معده می گویند. پپسین موجود در شیره معده یکی از آنزیم های اصلی درگیر در هضم پروتئین است و وظیفه آن شکستن پروتئین ها به قطعات کوچکتر پپتیدها و اسیدهای آمینه است. این ماده علاوه بر مصارف بیولوژیکی در انسان و حیوان، در صنعت نیز کاربرد دارد. از جمله این صنایع می توان از آن در صنعت چرم سازی (از بین بردن مو و بافت باقی مانده روی پوست)، تولید غلات نیمه کاره و استفاده به عنوان پنیر استفاده کرد.

خواص پپسین

• هضم پروتئین های غذایی
• اسیدیته
• خاصیت آنزیمی

استفاده از پپسین

• پپسین به عنوان کشک برای استخراج کلاژن از ژلاتین استفاده می شود.
• در تولید مواد ضد عفونی کننده دندان استفاده می شود.
• در تهیه برخی آنتی بادی ها (Fab) و انجام آزمایشات مربوطه
• در تهیه برخی داروها برای درمان برخی بیماری ها مانند سوء هاضمه، گاسترالژی، استفراغ لجباز، اسهال نوزاد، بیهوشی و برخی سرطان ها نقش دارد.
• از آن قرص و کپسول تولید می شود که باعث هضم غذا و افزایش اشتها می شود.