بروشور فارسی

هدف از استفاده

کیت iFISH® c‑MYC (MYC) Breakapart برای شناسایی تغییرات ساختاری و بازآرایی‌های ژن c‑MYC در سلول‌های انسانی به روش فلورسانس در محل (FISH) طراحی شده است.

این محصول یک ابزار تشخیصی درون‌آزمایشگاهی (in vitro) بوده و طبق دستورالعمل اتحادیه اروپا 98/79/EC مجاز است.

ارتباط بالینی

ژن c‑MYC در ناحیه 8q24.21 از کروموزوم ۸ قرار دارد و کدکنندهٔ یک فاکتور رونویسی (transcription factor) است که در تنظیم رشد سلولی، تمایز، تکثیر و آپوپتوز نقش دارد.

بازآرایی‌های این ژن منجر به افزایش بیان MYC می‌شوند و در طیف وسیعی از بدخیمی‌ها دیده می‌گردند، از جمله:

• لنفوم‌های Burkitt،
• لنفوم‌های منتشر بزرگ سلول B،
• و سایر تومورهای جامد با منشاء اپی‌تلیال یا هماتولوژیک.

روش FISH با استفاده از پروب‌های اختصاصی به شناسایی جداشدگی سیگنال‌ها (breakapart) در محل ژن MYC کمک می‌کند؛ یافته‌ای که بیانگر شکست یا جابه‌جایی در ناحیه 8q24 است.

اجزای کیت

• ✅ Probe Tube (100 μl, 10 tests)
  • پروب 5′‑MYC (فلوروفور قرمز)
  • پروب 3′‑MYC (فلوروفور سبز)
• ✅ DAPI Counterstain (0.150 μg/ml) – برای رنگ‌آمیزی هسته‌ها

هر دو پروب به نواحی مجاور شکست ژن c‑MYC متصل می‌شوند و جداشدگی رنگی آن‌ها نشان‌دهندهٔ حضور یک بازآرایی ژنی است.

مواد و تجهیزات مورد نیاز

شامل میکروسکوپ فلورسانس با فیلترهای سبز/قرمز، هیتر 80°C، چمبر هیبریداسیون مرطوب، محلول SSC، Tween‑20، اتانول، Fixogum Rubber Cement، و آب مقطر.

هشدارها

• فقط برای استفاده درون‌آزمایشگاهی (In vitro diagnostic use)
• فقط به‌وسیله افراد حرفه‌ای با آموزش تخصصی
• DAPI احتمالاً سرطان‌زا است؛ از تماس مستقیم پوست و چشم با آن اجتناب شود.
• از نور محافظت شود، زیرا فلوروفورها در معرض نور شدید تخریب می‌شوند.
• در هر آزمایش از تجهیزات استریل مستقل استفاده کنید تا از آلودگی جلوگیری گردد.
• در صورت نیاز، برگه ایمنی مواد (MSDS) قابل درخواست از شرکت سازنده است.

اصل آزمایش

پروب‌های DNA فلورسانس به انتهای 5′ و 3′ ناحیه ژن c‑MYC متصل می‌شوند.

در سلول‌های طبیعی، دو سیگنال هم‌پوشان یا نزدیک (قرمز و سبز) دیده می‌شود — اما در سلول‌هایی با بازآرایی، سیگنال‌ها از هم دور می‌شوند (breakapart pattern).

این جدایش تصویری به‌طور مستقیم تحت میکروسکوپ فلورسانس قابل مشاهده است.

پروتکل FISH

1. آماده‌سازی نمونه: چکیده سلولی روی لام خشک شود.
2. افزودن پروب: 10 µl پروب اضافه شود و لامل با چسب لاستیکی ثابت گردد.
3. دناتوراسیون: در 72°C به مدت ۴ دقیقه.
4. هیبریداسیون: در 37°C برای ۱۶–۱۸ ساعت در حوض مرطوب.
5. شستشو: ابتدا 0.4xSSC در 72°C (۳۰ ثانیه)، سپس در 2xSSC/0.05% Tween‑20 (۱ دقیقه).
6. رنگ‌آمیزی: 10 µl DAPI برای 10 دقیقه در 4°C، سپس مشاهده زیر میکروسکوپ.

عملکرد و ویژگی‌ها

• اختصاصیت (Specificity): پروب‌های طراحی‌شده فقط به ناحیه MYC متصل می‌شوند؛ هیچ سیگنال غیرمستقیم گزارش نشده است.
• دقت (Accuracy): بیش از ۹۵٪ تطابق با نتایج کاریوتایپ و سایر تست‌های مولکولی.
• حساسیت (Sensitivity): قادر به تشخیص سلول‌هایی با بازآرایی در مواردی با کمتر از ۱۰٪ سلول‌های درگیر.
• تکرارپذیری: >۹۵٪ در آزمایش‌های مستقل با کاربران مختلف.

نگهداری

• در دمای –25°C تا –15°C نگهداری شود.
• از تابش مستقیم نور محافظت گردد.
• تاریخ انقضا را بررسی کنید؛ پس از گذشت تاریخ مصرف، استفاده نشود.

محدودیت‌ها

• تنها برای ارزیابی ناحیه ژن c‑MYC کاربرد دارد، سایر تغییرات ژنی را شناسایی نمی‌کند.
• نتایج باید با یافته‌های هیستوپاتولوژی، سیتوژنتیک و بالینی ترکیب شوند.
• صرفاً توسط اپراتورهای مجرب در زمینه ژنتیک مولکولی اجرا گردد.

بروشور انگلیسی

Intended Use

The iFISH® c‑MYC (MYC) Breakapart Kit is intended for the qualitative detection of rearrangements affecting the c‑MYC gene locus in human cells, using fluorescence in situ hybridization (FISH).

This in vitro diagnostic product complies with the European Directive 98/79/EC.

Clinical Significance

The c‑MYC (MYC) gene is located on chromosome 8, region 8q24.21, encoding a transcription factor that regulates fundamental biological processes such as cell growth, differentiation, proliferation, and apoptosis.

Genetic rearrangements within this locus lead to MYC overexpression, observed in various malignancies:

• Burkitt lymphoma,
• Diffuse large B‑cell lymphoma,
• and other epithelial or hematologic tumors.

The FISH breakapart assay detects split signals at the MYC locus, indicating the presence of a chromosomal translocation or structural disruption involving 8q24.

Kit Components

• ✅ Probe Tube (100 µl, 10 tests)
  • 5′‑MYC probe (Red fluorochrome)
  • 3′‑MYC probe (Green fluorochrome)
• ✅ DAPI Counterstain (0.150 µg/ml) — for nuclear visualization.

In normal cells, the two signals overlap or appear adjacent; in rearranged cells, red and green signals are separated, revealing a breakapart pattern.

Required Materials

Fluorescence microscope with suitable filter sets (green/red), hybridization chamber, 80°C heater, SSC and Tween‑20 solutions, Fixogum sealing cement, ethanol, and deionized water.

Warnings and Precautions

• For in vitro diagnostic use only.
• To be used by trained professionals only.
• DAPI is potentially carcinogenic — avoid skin and eye contact.
• Protect all reagents from light exposure.
• Avoid contamination — use separate sterile tools for each sample.
• Material Safety Data Sheet (MSDS) is available upon request.

Test Principle

Fluorescent probes bind to the 5′ and 3′ ends of the MYC locus.

In a normal genotype, the red and green signals are juxtaposed.

When a rearrangement occurs, the signals are spatially separated on the nucleus image — seen as a breakapart signal pattern under the fluorescence microscope.

FISH Protocol

1. Sample preparation: Drop cell suspension on clean slide, allow to dry.
2. Probe addition: Apply 10 µl probe, cover with coverslip, seal edges with rubber cement.
3. Denaturation: 4 min at 72°C.
4. Hybridization: 16–18 hr at 37°C in humidity.
5. Washing: 0.4xSSC at 72°C (30 s), then 2xSSC + 0.05% Tween‑20 (1 min at room temperature).
6. Counterstaining: Apply 10 µl DAPI, incubate 10 min at 4°C, then examine under microscope.

Performance Characteristics

• Specificity: Probes hybridize only to MYC loci; no cross‑reactive signals reported.
• Accuracy: >95% concordant with conventional cytogenetic results.
• Sensitivity: Detects rearrangements in specimens with as little as 10% involved cells.
• Reproducibility: Consistent results in >95% of inter‑laboratory runs.

Storage

• Store between –25°C and –15°C.
• Protect from light.
• Use within expiry date as indicated on vial label.

Limitations

• Detects only structural rearrangements at MYC locus.
• Should be interpreted alongside cytogenetic, histopathologic, and clinical data.
• For use by qualified cytogenetic professionals only.

میزان -رنگ

• Probe Tube (100 μl, 10 tests)
  • پروب 5′‑MYC (فلوروفور قرمز)
  • پروب 3′‑MYC (فلوروفور سبز)
  • 
    
• ✅ DAPI Counterstain (0.150 μg/ml) – برای رنگ‌آمیزی هسته‌ها