FISH HER2

آموزش و راه اندازی ,تفسیر تکنیک هیبریدیزاسیون درجا

  انجام تست FISH HER2 برای تشخیص سرطان سینه :

ERBB2 (HER2) FISH Probe

برای یادگیری  این تکنیک میتوانید مطالب مهم را از بخش ویژه آموزشی خریداری نمایید.

پروتکل کیت برای اماده سازی تست FISH HER2

fish tissue.pdf

سرطان پستان زودرس چیست؟

سرطان پستان در اوایل زمانی است که سرطان فقط در پستان یا غدد لنفاوی مجاور یافت می شود و به سایر قسمت های بدن گسترش نیافته است. زیر گروه های مختلفی از سرطان پستان وجود دارد، بر اساس اینکه آیا گیرنده های هورمونی مانند گیرنده های استروژن یا سایر پروتئین ها در نحوه تقسیم و رشد سرطان دخیل هستند.

شایع ترین نوع HR +، HER2- سرطان پستان است که تقریبا 70٪ از تمام سرطان های پستان را تشکیل می دهد.

 تشخیص اولیه سرطان پستان و پیش اگهی:

پس از تشخیص سرطان پستان در اوایل، پزشک شما ممکن است در مورد انواع عوامل خطر با شما صحبت کند. این عوامل خطر ممکن است بر پیش اگهی یا دوره بیماری و احتمال بازگشت سرطان پستان تاثیر بگذارد.

اینها همچنین اطلاع می دهند که کدام درمان ها ممکن است مفیدتر باشند. عوامل خطر می توانند شامل:

• اندازه تومور
• درگیری غدد لنفاوی یا اینکه ایا سرطان از پستان به غدد لنفاوی مجاور گسترش یافته است
• درجه تومور، به درجه ای اشاره دارد که سلول های تومور پستان مانند سلول های طبیعی در مقابل سلول های سرطانی به نظر می رسند.

همراه با وضعیت گیرنده هورمون و وضعیت HER2، این عوامل بیماری به تعیین بهترین مسیر برای درمان کمک می کنند. آنها همچنین برای کمک به درک خطر عود سرطان پستان یا بازگشت دوباره، پس یا در طول درمان استفاده می شوند.

اگر سرطان پستان من به غدد لنفاوی گسترش یافته باشد چه معنایی دارد؟

گره های لنفاوی ساختارهای هستند که حاوی سلول های ایمنی هستند و بخشی از آنچه که سیستم لنفاوی نامیده می شود. درگیری غدد لنفاوی یا سرطان پستان غدد لنفاوی مثبت به این معنی است که سرطان به غدد لنفاوی در مناطق نزدیک مانند زیر بغل گسترش یافته است.

درگیری غدد لنفاوی، اندازه تومور و بسیاری از عوامل دیگر می تواند بر خطر عود در HR +، HER2 و سرطان پستان تاثیر بگذارد.سرطان پستان با درگیری گره یا گره مثبت، در معرض خطر بالا قرار دارد، به این معنی که احتمال عود می تواند حتی بیشتر باشد.

درمان اولیه سرطان پستان

جراحی

جراحی اغلب اولین شکل درمان برای سرطان پستان اولیه است. این می تواند شامل ماستکتومی - یک روش برای حذف کل پستان - یا یک لامپکتومی برای حذف تومور باشد. نوع درمان پس از جراحی بستگی به ویژگی های مربوط به تومور و بیماری دارد، مانند:

• اندازه تومور
• میزان درگیری گره (یعنی تعداد غدد لنفاوی درگیر)
• ویژگی های تومور (وضعیت گیرنده هورمون، وضعیت HER2)

شیمی درمانی و پرتو درمانی

شیمی درمانی را می توان قبل از جراحی (neoadjuvant) یا بعد از جراحی (adjuvant) انجام داد. شیمی درمانی می تواند به کاهش خطر بازگشت سرطان کمک کند، با کشتن سلول های سرطانی باقی مانده یا باقی مانده که ممکن است در بدن گردش کنند. شیمی درمانی به عنوان یک درمان سیستمیک در نظر گرفته می شود زیرا در سراسر بدن حرکت می کند و سلول های فراتر از پستان را تحت تاثیر قرار می دهد.

پرتودرمانی به طور کلی پس از جراحی و شیمی درمانی انجام می شود و از پرتوهای هدفمند انرژی شدید مانند اشعه ایکس با انرژی بالا برای کشتن سرطان باقی مانده در پستان یا اطراف گره های لنفاوی مجاور استفاده می کند.

هورمون درمانی و سایر درمان های هدفمند

در HR +، HER2- سرطان پستان، هورمون استروژن می تواند مانند سوخت برای هر سلول سرطانی باقی مانده عمل کند و به انها کمک کند تا تقسیم و رشد کنند. پس از جراحی، افراد مبتلا به HR +، HER2، سرطان پستان اولیه ممکن است درمان را با هورمون درمانی ادامه دهند، که هورمون هایی مانند استروژن را هدف قرار می دهد و مسدود می کند تا به جلوگیری از رشد و گسترش سلول های سرطانی کمک کند. هورمون درمانی همچنین ممکن است به عنوان درمان غدد درون ریز نیز نامیده شود.

مانند شیمی درمانی، هدف هورمون درمانی کمکی نیز کمک به جلوگیری یا کاهش خطر عود است.

چرا باید آزمایش HER2 انجام دهم؟

سرطان های پستان HER2 مثبت اغلب تهاجمی تر از سرطان های پستان HER2 منفی هستند. انها همچنین احتمال بیشتری برای بازگشت دارند. داروهایی در دسترس هستند که به طور خاص برای هدف قرار دادن HER2 طراحی شده اند. این داروها در درمان این نوع سرطان پستان بسیار موثر هستند.

اگر سرطان پستان دارید، پیدا کردن اینکه ایا سرطان شما HER2 مثبت یا HER2 منفی است، یک اولویت است. مهم است که ازمایشاتی داشته باشید که این را تعیین کند، زمانی که متخصص مراقبت های بهداشتی شما انها را برای شما سفارش می دهد. نتایج در مورد گزینه های درمانی و چشم انداز شما نقش مهمی ایفا می کنند.

تست FISH و IHC

برای تعیین اینکه ایا سرطان پستان شما HER2 مثبت است، پزشک شما دستور ازمایش را بر روی نمونه بافت انجام می دهد.دو نوع ازمایش برای تشخیص HER2 تایید شده است: 

• هیبریداسیون در محل (ISH) 
• ایمونوهیستوشیمی در محل هیبریداسیون ( FISH) 

تست FISH  نسبت به تست cish ارجح تر میباشد .

تست ایمونوهیستوشیمی (IHC)

تست های ایمونوهیستوشیمی (IHC) برای دیدن اینکه ایا سلول های سرطانی پستان دارای گیرنده های پروتئین HER2 بیش از حد هستند، انجام می شود. استفاده راهنمای بالینیمنبع مورد اعتماد، در زیر این است که چگونه یک متخصص مراقبت های بهداشتی نتایج test شما را تفسیر می کند:

• نتیجه 0 منفی است.
• نتیجه 1+ نیز منفی است.
• نتیجه 2+ مبهم (نامشخص) در نظر گرفته می شود.
• نتیجه 3+ مثبت است.

برخی از سرطان های پستان که نتیجه IHC 1 + یا نتیجه IHC 2 + همراه با test ماهی منفی دارند، ممکن است سرطان های HER2 کم نامیده شوند.

در طول test IHC، پاتولوژیست ها بافت پستان را زیر میکروسکوپ تجزیه و تحلیل می کنند. انها از لکه های خاصی استفاده می کنند تا ببینند چه تعداد گیرنده در سلول های سرطانی پستان وجود دارد. هیچ تست دیگری برای نتیجه 0 یا 1 + مورد نیاز نیست.

نتیجه 2+ نامشخص در نظر گرفته می شود. ازمایش های بیشتری لازم خواهد بود.

انچه در طول ازمایش HER2 انتظار می رود

برای تشخیص صحیح وضعیت HER2 سرطان، پزشک شما بیوپسی بافت پستان را سفارش می دهد. در بیشتر موارد، متخصص مراقبت های بهداشتی که بیوپسی را انجام می دهد، از بیهوشی موضعی برای به حداقل رساندن درد استفاده می کند. این بافت برای بررسی به ازمایشگاه پاتولوژی ارسال خواهد شد.

در برخی موارد، نمونه باید برای ازمایش به یک ازمایشگاه خارجی ارسال شود. اطمینان حاصل کنید که ازمایشگاهی که بررسی پاتولوژی شما را انجام می دهد معتبر و معتبر است. مهم است که ازمایشگاه از کیت های ازمایش HER2 تایید شده توسط سازمان غذا و دارو (FDA) استفاده کند.

آیا آزمایش HER2 دقیق است؟

این که ایا نتایج شما مثبت یا منفی است، از پزشک خود بپرسید که چقدر در آزمایشگاهی که مورد استفاده قرار گرفته و در نتایج اعتماد به نفس دارد. بپرسید که چه کسی ژنتیک و پاتولوژی  نمونه شما را بررسی کرده است. 

آزمایش (HER2-neu Amplification (FISH چیست؟

 آزمایش (HER2-neu Amplification (FISHو بررسی ضعیت گیرنده های ER ،PR و HER2 در بیماران مبتلا به سرطان پستان برای تعیین نوع تومور، پیش آگهی بیمار و همچنین انتخاب درمان اختصاصی کمک کننده می باشد. این گیرنده ها به طور روتین با روش ایمنوهیستوشیمی (IHC) بر روی نمونه بافتی بیماران بررسی می شود.

در بعضی از انواع سرطان ها از جمله سرطان پستان، تعداد کپی های ژن HER2 و پروتئین آن افزایش می یابد و به عنوان یک عامل پیشرفت سرطان عمل می کند. این سلول های توموری را HER2 مثبت می نامند. با توجه به اهمیت این گیرنده، ابتدا با روش IHC، حضور ویا عدم حضور پروتئین های HER2 بر روی نمونه بافت تومور مورد بررسی قرار می گیرد. نتایج آزمایش IHC بر اساس شدت رنگ حاصل به سه صورت 3 مثبت، 2 مثبت و 1 مثبت گزارش می شود که موارد 3 مثبت HER2 positive و موارد 1 مثبت HER2 negative در نظر می گیرند.  بر اساس این دو نتیجه از آزمایش IHC می توان برای بیمار تصمیم گیری کرد. اما در ارتباط با موارد 2 مثبت آزمایش IHC، وضعیت HER2 حتما باید توسط آزمایش FISH نیز بررسی شود. جواب نهایی بر اساس نتیجه آن داده شود. در این آزمایش با بکارگیری پروب های اختصاصی تعداد کپی ژن HER2 بر روی گستره کروموزومی مورد ارزیابی قرار می گیرد.

چرا باید آزمایش (HER2-neu Amplification (FISH را انجام داد؟

برای تعیین وضعیت HER2 در بیماران مبتلا به سرطان پستان  از این آزمایش استفاده می شود. این آزمایش به عنوان یک مارکر پیش آگهی برای مشخص کردن شدت بیماری فرد و همچنین برای تصمیم گیری برای استفاده از درمان های با هدف HER2 درخواست می شود.

نظر به این که استفاده از داروی (Trastuzumab (Herceptin با عوارض قلبی همراه بوده و هزینه بالایی دارد. توصیه می­شود که پیش از تجویز Trastuzumab نتیجه این آزمایش مشخص گردد. این دارو علاوه بر سرطان پستان، در درمان سرطان های پیشرفته و متاستاتیک معده و مری نیز تجویز می شود. از این رو بررسی وضعیت HER2 در این بیماران نیز برای تعیین اینکه آیا از درمان با این دارو سود می برند یا نه توصیه می شود.

آزمایش (HER2-neu Amplification (FISH در چه زمانی انجام می شود؟

زمانی که نتیجه آزمایش IHC به صورت 2 مثبت گزارش می شود، این آزمایش برای تایید آن انجام می شود.

نمونه مورد نیاز:

از بیوپسی و یا نمونه بافت (بلوک پارافینه FFPE) استفاده می شود.

آمادگی لازم پیش از انجام آزمایش:

نیاز به آمادگی خاصی ندارد.

مدت زمان جوابدهی:

جواب این آزمایش بطور معمول ۱۵ روز کاری بعد از نمونه گیری آماده می شود.

نتایج این آزمایش چگونه تفسیر می شوند؟

نتیجه مثبت (positive): بدین مفهوم است که فرد مورد بررسی HER2 مثبت است و بیماری وخیم تری نسبت به موارد منفی دارد. این فرد می تواند کاندید دریافت داروهای با هدف HER2 مثل trastuzumab، lapatinib و pertuzumab  باشد. در حالی که به درمان های اندوکرینی پاسخ نمی دهد و امکان دارد به شیمی درمانی مقاومت نشان دهد.

نتیجه منفی (negative): اگر فردی برای HER2 منفی باشد به این معنی است که درمان های با هدف HER2 برای او   اثر بخش نبوده و از این دسته از درمان ها سودی نمی برد.

ژن ERBB2 (یا همچنین به عنوان HER2 شناخته می‌شود)، یکی از ژن‌های مهم در سرطان سینه است. این ژن کدگذاری برای گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی انسانی (HER2) را انجام می‌دهد1. گیرنده HER2 یک گیرنده گلیکوپروتئینی غشایی است که در خانواده تیروزین کینازها قرار دارد. این گیرنده به صورت همودایمر یا هترودایمر با سایر اعضای خانواده گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی، مانند HER1، HER3 و HER4، ارتباط برقرار می‌کند.

سرطان سینه HER2 مثبت به معنای افزایش بیش از حد بیان گیرنده HER2 در سلول‌های سرطانی سینه است. این نوع سرطان تهاجمی‌تر است و به موازات درجه و مرحله سرطان، میزان هورمون‌های استروژن و پروژسترون نیز در تعیین روش درمانی نقش دارد. در گذشته، بیماران HER2 مثبت دارای پیش‌آگهی ضعیف‌تری بودند، اما اکنون با داروهای هدفمندی که می‌توانند با این گیرنده‌ها تداخل داشته باشند، پیش‌آگهی سرطان سینه HER2 مثبت بهبود یافته است.

تشخیص به موقع سرطان سینه HER2 مثبت نقش بسزایی در مدیریت بیماری دارد و می‌تواند به بهبود کیفیت زندگی و طول عمر بیماران کمک کند. برای تشخیص این نوع سرطان، آزمایش HER2 با استفاده از تکنیک FISH بر روی بلوک‌های پارافینی انجام می‌شود.

 داروی هرسپتین یک داروی تارگت‌تراپی است که برای درمان برخی از انواع سرطان، از جمله سرطان پستان، مری، معده، روده و رحم استفاده می‌شود1. این دارو به گیرنده HER2 (ایستگاه‌های اتصال) روی سلول‌های سرطانی متصل می‌شود و از رشد آن‌ها جلوگیری می‌کند.

برای مصرف داروی هرسپتین، نکات زیر را در نظر داشته باشید:

• این دارو به تنهایی یا همراه با سایر داروها در درمان سرطان پستان و معده (نوع HER2 مثبت) استفاده می‌شود.
• تراستوزوماب (نام تجاری: هرسپتین) به صورت پودر قابل تزریق است و توسط پرستار آشنا به داروهای انکولوژی تزریق می‌شود.

در مورد تکنیک‌های تشخیصی برای ارزیابی وضعیت HER2 در سرطان سینه، اجازه دهید توضیحاتی را ارائه دهم:

1. تکنیک IHC (ایمونوهیستوشیمی):
   • ایمونوهیستوشیمی (IHC) یک روش تشخیصی است که برای تعیین میزان بیان پروتئین‌ها در نمونه‌های بافتی استفاده می‌شود.
   • در تشخیص سرطان سینه، IHC برای تعیین میزان پروتئین گیرنده HER2 (همچنین به عنوان HER2/neu شناخته می‌شود) استفاده می‌شود.
   • نتیجه‌های IHC به صورت تیتر وار ارائه می‌شود. این تیترها معمولاً از 0 تا 3+ هستند:
     • 0: بیان منفی (کمتر از 10% سلول‌ها HER2 را بیان می‌کنند)
     • 1+: بیان ضعیف (10% تا 30% سلول‌ها HER2 را بیان می‌کنند)
     • 2+: بیان مرزی (30% تا 50% سلول‌ها HER2 را بیان می‌کنند)
     • 3+: بیان قوی (بیش از 50% سلول‌ها HER2 را بیان می‌کنند)
2. تکنیک FISH (هیبریداسیون در جای فلورسنت):
   • FISH یک تکنیک مولکولی است که برای تشخیص تغییرات در تعداد کپی ژن‌ها (مانند HER2) در سلول‌ها استفاده می‌شود.
   • در تشخیص HER2، تست FISH بر روی نمونه‌های بافتی انجام می‌شود.
   • نتایج FISH به صورت دسته‌بندی شده ارائه می‌شود: نرمال، افزایش کپی (amplification)، یا کاهش کپی (deletion).
   • FISH حساس‌تر از IHC است و به عنوان تکنیک استاندارد برای تعیین وضعیت HER2 در موارد مرزی (2+) مورد استفاده قرار می‌گیرد.
3. تکنیک CISH (هیبریداسیون در جای کروموژنیک):
   • CISH نیز یک تکنیک مولکولی است که مشابه FISH عمل می‌کند.
   • در CISH، از پروب‌های DNA استفاده می‌شود و نتایج با استفاده از واکنش آنزیماتیک (مانند IHC) بررسی می‌شوند.
   • CISH از نظر امکانات و هزینه نسبت به FISH مزیت‌هایی دارد و می‌تواند به عنوان جایگزینی برای تایید نتایج مبهم IHC استفاده شود
   • فرصتی داشته باشید این مطالب  را مرور کنید جالب خواهد بود ..
     بیایید یک نگاهی به تاریخچه کشف ژن HER2 و اکتشافات مهم در مورد سرطان سینه بیاندازیم
4. 
   
   1. کشف ژن HER2:
      • در دهه 1980، تیم‌های پژوهشی به دنبال شناسایی ژن‌هایی بودند که در تومورهای سرطانی نقش دارند.
      • در سال 1984، ژن HER2 (یا همان ERBB2) کشف شد. این ژن کدگذاری برای گیرنده نوع 2 فاکتور رشد اپیدرمال انسانی (HER2) را انجام می‌دهد1.
      • گیرنده HER2 یک پروتئین است که بر روی سطح سلول‌های سرطانی قرار دارد و نقش مهمی در رشد و تکثیر سلول‌ها ایفا می‌کند2.
   2. HER2 و سرطان سینه:
      • بیان بالای گیرنده HER2 در سلول‌های سرطانی منجر به رشد سریعتر و تهاجمی‌تر تومورها می‌شود2.
      • تقریباً 15 تا 20 درصد از بیماران سرطان سینه به گروه HER2 مثبت تعلق دارند1.
      • تست HER2 برای تعیین پیشرفت بیماری و تشخیص مناسب بودن درمان هرسپتین (Herceptin) انجام می‌شود. هرسپتین درمانی باید فقط برای بیماران HER2 مثبت انجام شود1.
   3. تشخیص HER2:
      • ابتدا با استفاده از روش ایمونوهیستوشیمی (IHC)، مقدار پروتئین HER2 در نمونه‌های بافتی اندازه‌گیری می‌شود.
      • اگر نتیجه IHC کمتر از 3 مثبت باشد، تکنیک‌های هیبریداسیون درون سلولی (CISH یا FISH) برای اندازه‌گیری دقیق تعداد کپی‌های ژن HER2 مورد تایید قرار می‌گیرند1.
5. به طور خلاصه، ژن HER2 نقش مهمی در پیش‌آگهی و پیشرفت سرطان سینه دارد و تشخیص دقیق آن از اهمیت بالایی برخوردار است. 

نویسنده :بهنیا صادقی

انجام خدمات تخصصی تکنیک هیبریداسیون درجا  HER2 FISH